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血清使用中常见问题
  • 发布日期:2021-07-26      浏览次数:90
    •                                                                     血清使用中常见问题
                                                                        检硕科学上海有限公司

            胎牛血清、新生牛血清、小牛血清有何区别?
      胎牛血清:指健康母牛正常分娩前采集胎牛血液加工而成的血清,其胎球蛋白较多,血清白蛋白含量高,而r-球蛋白含量极低甚至没有,并富含多种生长因子,是培养细胞zuiyou质的血清。

      新生牛血清:指健康母牛正常分娩后不久采集加工而成的血清,其内含多种生长因子。

      小牛血清:指出生后饲养一定时间(一周至六个月)再采集加工而成的血清,因与外界接触时间过长,故血清内r-球蛋白含量较高,不利于细胞培养,特别是不利于病毒研究与疫苗生产。

      1、 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?

      将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。  

      长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。

      2、血清中包含絮状沉淀,它们是什么,怎么处理?

      沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除去沉淀,离心血清(400g,1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失。

      3. 为什么要热灭活血清?

      加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。

      4. 有必要做热灭活吗?

      实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点",常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增

      5. 为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀?

      GIBICO的胎牛血清 没有预老化,储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在-20℃储存胎牛血清,避免反复冻融。

      6. 如何避免沉淀物的产生?

      解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实验显示非常容易产生沉淀物。

      解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。

      请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。

      血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

      7、细胞培养中如何防止黑点生成?

      (1)尽可能地减少血清冻融次数;

      (2)培养基无需37℃水浴;

      (3)培养基保持最佳PH值7.0-7.2;  

      (4)严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗;  

      (5)掌握细胞传代的最佳时机,细胞切勿生长过老。

      本篇文章转至实验之声


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