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Thermo 离子交换色谱柱使用和维护说明
  • 发布日期:2020-01-09      浏览次数:411
    • 为了使您的色谱柱能发挥最大的性能,敬请先阅读以下说明:

      1、 适用类型

      Thermo 离子交换色谱柱包括:BioBasic AXSCXHypersil SAXHypersil Gold AXSAX 等。

      2、 柱体积

      色谱柱的柱体积可以通过以下公式估算:

      V = 0.68 πr2L

      V 为色谱柱柱体积(mL),r 为色谱柱内径(cm),L 为色谱柱长度(cm)。

      3、 色谱柱柱效测试与保存

      离子交换色谱柱出厂时都经过柱效测试,请参考柱效报告。

      在条件允许情况下,请对新色谱柱进行柱效测试。

      离子交换色谱柱出厂时均保存在乙醇溶液中(如有不同,以柱效报告为准)。

      4、 温度

      所有硅胶基质色谱柱使用温度应低于 60℃。

      5、 样品

      建议将样品溶解在流动相或极性相近的溶剂中。如果使用梯度洗脱,则需要将样品溶解在初始流动相或极性相近的溶剂中。样品溶液不应含有任何颗粒物,建议使用 0.5μm 或更小粒径的滤膜过滤。同时建议在色谱系统中使用在线过滤器。

      6、 流动相

      所用溶剂通常为水、乙腈、甲醇等,Thermo 的离子交换色谱柱可以 100%水为流动相, 进行盐的梯度洗脱。流动相中含有机相时,请注意降低盐的浓度,以防止溶剂混合后盐从流动相中析出。更换流动相时也要注意这一问题,可先用含较高纯水的流动相除盐过渡。请将流动相的 pH 值控制在 2-8。缓冲盐浓度在 500 mM 以下。所有流动相,建议当日实验当日配制,并使用 2μm 滤膜过滤。

      7、 色谱柱安装

      请小心操作色谱柱。

      不要摔、碰色谱柱,这样会损坏色谱柱床,使色谱柱性能下降。使用合适的连接管路和接头,确保色谱柱连接处死体积降到最低(使用不锈钢接头时需要尤其注意)。我们建议使用 SLIPFREE 接头,此接头与 Thermo 色谱柱以及其他品牌色谱柱均完美匹配。

      8、 色谱柱平衡

      新柱在使用前,请预先用 20 倍柱体积甲醇/或乙腈冲洗色谱柱,然后以初始流动相(不含盐)冲洗 10 倍柱体积。在进行正式分析之前,请使用至少 20 倍柱体积的流动相冲洗色谱柱,以使色谱柱达到平衡。

      9、 色谱柱保护

      对于成分复杂的“脏”样品以及组分未知的样品,请尽量使用在线滤器或保护柱,如果可能,使用 SPE 小柱对样品进行前处理是更好的选择。上述做法可以有效延长色谱柱使用寿命。

      10、 色谱柱清洗

      常规清洗:每天完成分析之后,用 100% 水冲洗 30 倍柱体积除盐,然后用 20% 甲醇/或乙腈冲20 个柱体积,保存在 20% 甲醇/或乙腈中。

      清洗强保留污染物:如果发现离子交换色谱柱柱效出现大幅下降,可通过如下方法

      清洗离子交换色谱柱:首先用高浓度的缓冲盐溶液清洗(浓度是流动相的 5-10 倍,但不得超过 1M),冲洗 30倍柱体积。用 100% 水冲洗 20 倍柱体积以除盐后,再用 100%甲醇/或乙腈清洗 30 倍柱体积。最后用 20%甲醇/或乙腈水溶液(不含盐)保存。

      11、 色谱柱保存

      100水冲洗 30 倍柱体积除盐后,若短期不使用(<1 周),用 20% 甲醇或乙腈冲20 倍柱体积后,保存在 20甲醇/或乙腈中;若需长期放置(>1周),用 50甲醇/乙腈冲洗 20 倍柱体积后,保存在 50% 甲醇/或乙腈中。

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