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新的色谱柱柱活化冲洗技巧
  • 发布日期:2021-10-09      浏览次数:3224
    •                                                           新的色谱柱柱活化冲洗技巧

                                                            检硕科学器材(上海)有限公司

      新的色谱柱柱活化冲洗技巧

      方法/步骤

      一、新的色谱柱活化:采用100%甲醇1ml/min冲洗60min,再换成流动相进行平衡;如果流动相中含有缓冲盐,在换成流动相前,请使用过渡流动相过渡后再换流动相平衡;

      二、日常维护

      1、建议检测前样品和流动相进行过滤;

      2、建议每天做完样品后及时进行清洗;

      3、常规检测

      测试完后,直接把色谱柱反向连接采用90%有机相冲洗45min,最后保存在纯甲醇或纯乙腈中;

      4、使用缓冲盐条件:

      1)等度条件:使用缓冲盐之前和之后都用过渡流动相以1ml/min流速冲洗45min;

      2)梯度条件:使用缓冲盐之前与初始流动相组成相同的过渡流动相以1ml/min流速冲洗45min;

      注意:过渡流动相是指有机相和水相比例与分析流动相相同比例,只是不含有缓冲盐;

      3)缓冲盐冲洗干净后,采用90%有机相反向冲洗60min,最后保存在纯有机溶剂中;

      注意:如果使用缓冲液不能存留色谱柱中过夜;

      三、色谱柱的保存

      1. 短时间内色谱柱的保存

        如果使用时间间隔不超过四天,则色谱柱无需特别的维护,只需根据最后一次测试使用的流动相或样品的性质,在使用后用纯甲醇、纯水或甲醇与水的混合溶液进行淋洗,直至基线走平约半小时即可。

       2. 长时间色谱柱的保存

      如色谱柱长时间不用,则最好将其从HPLC仪中取下保存,取下前用合适的溶剂淋洗,洗去不适与保存色谱柱的洗脱液,如C18反相柱可以用纯甲醇或乙腈作为保存的介质,然后用塑料塞头将其塞紧,以免色谱柱内完全干燥。

      END

      注意事项

      色谱柱使用pH范围在1.5~10.0,通常建议使用范围pH为2.0~8.0比较合适,流动相超出pH范围将会导 致硅胶基质流失和键合相断裂使柱效下降,使用寿命变短,所以要严格控制pH范围

                                                                                                                                                 本篇转载至实验之家

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