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气相色谱峰拖尾、响应低甚至不出峰的主要原因
  • 发布日期:2019-10-30      浏览次数:314
    •   A) 系统污染、惰性下降

        系统惰性不好对活性组分峰形及响应的影响尤为明显。建议选用惰性优异的低流失气相色谱柱和色谱耗件,如去活的衬管。如果系统已经被污染,应及时对进样口和检测器进行维护。恢复被污染色谱柱的方法主要有:

        将进样口端截去 0.5~1 米,根据样品来源做进一步的判断,如果是半挥发污染物,还可以进一步考虑对色谱柱进行老化。

        污染严重时可截去更长或用溶剂彻底清洗色谱柱(必需是交联键合固定相)

        B) 色谱柱安装不正确或系统其他部位存在死体积

        毛细管柱在进样口和检测器的安装位置不当将影响峰形,请严格按照仪器的使用说明正确安装色谱柱。其他与毛细管柱相连接的部位也应注意降低死体积。

        C) 系统漏气

        需定期检查系统气密性、更换进样口备件。使用非纯石墨密封圈时,注意安装后的几次温度升降之后追加一次拧紧。

        D) 方法条件不佳

        对于低挥发性样品,需注意提高进样口和/或检测器、色谱柱、传输管线等处的温度,防止冷凝现象。

        有些样品在某些检测器的响应确实不高(甚至没有响应),如果样品不出峰,又没有参考响应值,应加大进样量确认出峰位置,并利用标样考查样品的响应值。

        E) 其他可能导致峰拖尾的原因:

        1 不分流模式下,分流放空阀开启过晚(通常应在 0.5~1.0 分钟之间)

        2 手动进样速度过慢

        3 检测器尾吹气流量不足

        4 PLOT 色谱柱样品过载

        5 组分共流出

        6 含磷化合物在 NPD 白色铷珠上易拖尾,建议使用黑色铷珠。

        A) 正确的安装,好的开始是成功的一半!

        1 区分进样口端与检测器端,铁标签上的字正对安装者。

        2 确保进样口的洁净度,如有污染,请更换衬管和分流平板。

        3正确切割KB毛细管柱

        4 安装之后做好气相色谱柱配置(EPC 系统,输入色谱柱规格后,请进行柱长校正)

        5对新色谱柱进行适度老化

        B) 正确的使用

        1 请勿划伤色谱柱表面的聚酰亚胺涂层,因此不要将色谱柱与尖锐的表面直接接触。

        2 注意色谱柱盒包装侧面的温度上下限。

        举例:KB-5MS, 30m×0.25mm×0.25μm,温度限为-60 o C 至 325 o C/350 o C。三个温度从左

        到右的含义分别是:

        温度下限:低于此温度使用可以导致柱效下降,但对色谱柱没有损害。

        恒温温度上限:恒温使用色谱柱时,此温度为******上限。

        程序升温温度上限:程序升温使用此色谱柱时,可升至此温度,但不可超过 15 分钟。

        1 确保密封无漏气 (使用纯度高的载气,新的进样隔垫,规格合适的密封圈都是必需的)

        2 做好样品前处理,防止将不挥发的物质及对色谱柱伤害较大的化合物(如:无机酸和碱)

        引入色谱柱中,如果无法将这此物质在进样前除去,请在分析柱前接保护柱。

        C) 气相色谱柱正确的保存

        1 气相色谱柱不使用时,请从 GC 上卸下,并用旧的密封隔垫将其两端封住。下一次使用时,需要把色谱柱两端修整掉 2-4cm,以确保隔垫碎屑不会堵塞色谱柱。

        2 如果把色谱柱留在加热的 GC 中,一定要保证始终有载气通过气相色谱柱。

        气相色谱仪启动后不久或气相色谱柱更换后不久,噪声是不可避免的,这是正常现象。噪声过大是指比正常的标准高得多的噪声或某些不正常的突变。

        注意:发现噪声过大时,请先检查气相色谱仪和积分仪使用的电网电源是否有异常波动或突变,特别是在同一电网电源上接有大功率装置时,更要注意。此外,请检查仪器的接地是否正确并且良好。

        A.改变量程范围,噪声的大小还是基本不变时,要考虑是否信号线的故障、放大器电路板的故障、输出信号线的故障、积分仪的故障。

        B.将火焰熄灭之后噪声如果还是很大,要考虑从检测器到放大器电路板这一段是否存在问题,请进行下列项目的检查:

        1).检查检测器的喷嘴、收集极、离子信号线插座、点火线等部分是否固定可靠,请排除接触不良的可能。

        2).检查检测器是否被污染,如果污染请进行清洗。

        3).要考虑是极化电压、放大器电路板、工作电源的故障。

        C.将火焰熄灭之后噪声如果降低或消失,要考虑是否检测器本身产生过大噪声:

        1).检查是否使用的气体纯度太低,请更换气体或使用气体过滤器去除气体中的杂质。

        2).检查检测器是否被污染,如果污染请进行清洗。

        3).检查空调器等冷暖设备的排风是否正对着气相色谱仪,请改变风向或更换仪器的位置。

        D.降低进样口温度后如果噪声变小,要考虑是否进样口有污染现象。

        E.降低气相色谱柱温度后如果噪声变小,要考虑是否载气纯度不够或色谱柱的老化不足,请更换载气或使用气体过滤器去除载气体中的杂质,并对色谱柱进行老化。

        气相色谱仪(柱)的选择

        F.如果需要更换气相色谱仪,气相色谱柱。

        1、毛细管柱载气流量的选择

        通过毛细管柱的载气流量要根据毛细管柱的柱长、柱径、膜厚以及被分析物的组成等综合因素设定。高流速虽然可以提高分析效率,但有时可能会因被测物与固定相之间交换不充分而降低柱效。因此,在实际分析中,流速的设定应在满足分离的前提下适当增加,以提高分析效率。对于气相色谱-质谱仪,还要考虑质谱真空泵的抽气量,气流速大还会影响到灵敏度。

        某些检测器,如电子捕获检测器,仅靠通过毛细管色谱柱的载气流量无法满足工作需求,因此,还需要补充加上尾吹气。另外,有些厂家的仪器采用在毛细管柱的末端加上尾吹气的设计,以减少扩散,改善色谱峰形,提高信噪比。

        2、毛细管柱柱温的选择

        柱温是影响色谱分离和分析效率的***重要参数,所以要根据分析目的和被测物性质,如:被测物的沸点、被测物极性、被测组分的多少,通过实验优化得到合适的柱温。交联型毛细管色谱柱相对而言柱流失比较少,可以在较高温度下工作。分析中通常采用程序升温模式,从而提高分离度和柱效。

        (1) 初始温度的选择

        初温的确定取决于谱图上***早流出峰的分离度,一般应低于样品中******沸点组分的温度。

        (2) 升温速率的选择

        升温速率对色谱分离度和峰形的影响******,对于多组分分析,可以设置多阶、不同升温速率的升温程序,以得到******的分离效果和峰形。

        (3) 终点温度的选择

        程序升温***终温度的确定主要取决于固定相和被测样品中******沸点的物质。另外,对于基质复杂的样品,可以考虑在固定相规定******温度下适当提高温度(但接质谱******不要这样做),并且在此温度下适当延长保持时间。

        3、进样方式的选择

        对于毛细管色谱分析有多种进样方式可以选择。残留分析应选择不分流进样或柱上进样,纯度分析则多选择分流进样,分流比根据被测物含量而定。但分流进样对定量精度会有影响,分流比越大定量精度越差。

        4、毛细管柱的选择

        固相萃取装置是一种被广泛应用且备受欢迎的样品前处理技术,就是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附,与样品的基体和干扰化合物分离,然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附,达到分离和富集目标化合物的目的。它在传统的液—液萃取基础上采用物质间相似作用的相似相溶原理并结合目前广泛应用的液相色谱和气相色谱固定相基本知识发展而来。

        三种固相萃取柱的操作方法介绍:

        一、反相萃取柱操作

        从极性基体中提取非极性的样品

        1、活化:以3—5毫升甲醇淋洗萃取柱;以3—5毫升去离子水(或缓冲液)淋洗萃取柱并保持萃取柱湿润

        2、上样:以合适的流速使样品均匀通过萃取柱

        3、清洗:以5毫升适当极性的溶剂洗脱吸附样品的萃取柱(常用的有纯水,缓冲液,水/有机溶剂混合液)

        4、洗脱:将被测样品,用1—5毫升非极性溶剂分批洗脱至收集容器

        二、正相萃取柱操作

        从非极性基体中提取极性的样品

        1、活化:3—5毫升非极性溶剂淋洗萃取柱

        2、清洗:以5毫升适当非极性的溶剂洗脱吸附样品的萃取柱

        3、洗脱:将被测样品,用1—5毫升极性溶剂分批洗脱至收集容器

        三、离子交换萃取柱

        提取带电荷的样品

        1、活化:以3—5毫升去离子水/或低离子强度的缓冲液淋洗萃取柱

        2、上样:以较低的流速,使样品均匀通过萃取柱

        3、清洗:5毫升去离子水/或低离子强度的缓冲液淋洗萃取柱

        4、洗脱:将被测样品,用1—5毫升高离子强度的缓冲液洗脱至收集容器

        四、固相萃取柱的选择

      固相萃取柱目录:

        1:石墨化炭及复合SPE系列(农残专用),固相萃取柱

        2:聚合物基质SPE系列(HLB-MCX-MAX-WCX-WAX)固相萃取柱

        3:硅胶基质正相SPE系列(硅胶-氟硅土-氧化铝-Diol-PSA-氨基)固相萃取柱

        4:硅胶基质离子交换SPE系列(SAX-SCX-PRS)固相萃取柱

        5:硅胶基质反相SPE系列(C18-C8-CN)固相萃取柱

        6:前处理及分析应用(固相萃取)固相萃取柱

        7:C8-SCX-SAX混合SPE系列(药物代谢及滥用)固相萃取柱

        离子色谱是液相色谱的一种,故又称离子色谱(HPIC)或现代离子色谱,其有别于传统离子交换色谱柱色谱的主要是树脂具有很高的交联度和较低的交换容量,进样体积很小,用柱塞泵输送淋洗液通常对淋出液进行在线自动连续电导检测。

        离子色谱仪的使用:

        1、流动相瓶中滤头要注意始终处于液面以下,防止将溶液吸干。

        2、启动泵前观察从流动相瓶到泵之间的管路中是否有气泡,如果有则应将其排除。

        排除方法如下:先将与泵相连的塑料流路接头拧下来,用洗耳球吸满去离子水,从与泵段相连的流路管中注入,将流路管中的气泡排除干净。然后再将流动相瓶(一般为去离子水瓶)抬高,再将流路接头与泵连接好。启动泵,打开泵内排气阀选钮,将泵内气泡排除干净,一般观察为流出液比较均匀,再将泵排气阀拧紧。(注意:此项操作时,整个流路是与色谱柱断开的)

        3、用去离子水或流动相清洗整个流路时,可以采用大流量清洗(一般可将流量设置为2.0ml/min,但不能再太大)以缩短清洗时间,但在通流动相接色谱柱时需要将流量调整为色谱柱使用流量条件。

        操作如下:先将泵停止,再按动正号或负号,将光标调整至流量位置,按下确认键,再通过调节正负号将流量调节至色谱柱使用条件后,再按确认键。此时需要等待5s后再启动泵开关。接色谱柱时注意先将接头在色谱柱前端抵上2-5s,将色谱柱前端气泡排除后再将接头拧紧。待色谱柱下端流出溶液后,在将色谱柱下端接头拧上。(注意:接头不能拧的太紧,防止将管路卡的太紧而造成系统压力增大,拧的程度以不漏液为宜)

        4、使用阴离子色谱柱检测,通流动相时注意将电流旋钮打开,调节至90-100mA,使用完毕后要将电流旋钮关闭。

        5、进样时阀的扳动要注意,不能太快,以免损伤阀体;也不能太慢,以免造成样品流失。在进样过程中,要严格按清洗程序操作,以减小前次样品残留对本次检测的影响。

        随着人们对产品质量意识的日益加强,化学分析仪器的自动化程度不断提高,化验室中分析天平的使用也越来越广泛了。电子分析天平虽操作简单,但日常维护也是必不可少的。日常要注意以下几点:

        1、将天平置于稳定的工作台上,避免振动、气流及阳光照射,防止腐蚀性气体的侵蚀。高精度的电子天平要满足说明书要求的温度和湿度波动的条件,才能达到规定的称量准确度要求。

        2、称量易挥发和具有腐蚀性的物品时,要盛放在密闭的容器中,以免腐蚀和损坏电子天平。

        3、秤盘和外壳可以用软布轻轻擦净,切不可用强溶剂擦洗。

        4、防止超载,注意被称物体的质量应在天平的******载量以内,电子天平大多都有保护装置,但超载可能会损坏天平!

        5、较长时间不使用的天平,应每隔一定时间通一次电,以保证电子元器件的干燥。电子天平搬动和运输时应将秤盘和托盘取下。

        6、称量室不要放置干燥剂,因为干燥剂的吸水和放水形成了不同方向的气流,引起空气浮力的变化,导致称量不稳定。

        7、经常对电子天平进行自校或定期外校,保证其处于******状态。

        由于分光光度计是一种常用的实验室分析仪器,所以无论是从款式上还是价格上五花八门,一般往往给初购者造成眼花缭乱、令人无所适从的感觉;价格因素一般是购买者首先考虑的问题,尽管分光光度计种类繁多,但不外乎:简易型、中档型和型三大类:

        (1)简易型仪器及其特点:

        结构:这种类型的仪器多为单光束型,即只有一束光照射到样品室内;光源一般仅有钨灯;样品支架一般为推拉式四联池架;波长选择多为手动查找,重复性差;狭缝为一个固定宽度模式;光学性能指标较低;检测器多为光敏二极管;显示器多为机械表头或数码管显示器,数据处理器一般没有。此类仪器生产以国内厂家居多。测量模式:多为定点(固定波长)吸光度或透过率测量方式,基本不能进行波长扫描测量。适应范围:小型实验室及示范教学,分析样品相对简单,测试结果精度要求不高。

        (2)中档型仪器及其特点:

        结构:此类仪器多为双光束型或准双光束型,但也有单光束仪器型;光源有钨灯和氘灯;样品池支架为两个固定式,分别是样品通道和参比通道;波长按照设定模式自动查找或扫描;狭缝多数仍为2nm固定宽度模式,也有1.5nm狭缝宽度的;检测器多数是硅光二极管,但也有少数用光电倍增管的;光学性能相对较高,其中光栅的技术指标尤为重要,******的光栅为凹面型,为此无论在分辨率还是在杂散光方面指标要优于简易型仪器;显示器为液晶式或连接电脑,数据处理可由仪器自身具有的或外接计算机处理。并有一定的测量附件。测量模式:透过率、吸光度、浓度直读、单光束;单点及扫描均可。适应范围:此类仪器基本可满足大多实验室分析需要。

        (3)型仪器及特点:

        结构:除了中档仪器的特点外,主要是光学系统的设计和制造工艺水平更高了,比如使用了大尺寸的凹面光栅,并且光栅刻槽数大于1800条/mm;波长检测范围有的仪器在近红外区已经超过1100nm,可达到2600nm;狭缝均为连续可调型,以适应高分辨率的需要,波长扫描速度的档位也增加了,检测器均使用高灵敏度的光电倍增管和红外检测器;数据处理目前基本是电脑来执行;衡量一台仪器的另外一个指标是看此仪器是否具有丰富的附属测量器件,如偏振附件、积分球附件、反射附件、自动进样器附件、色度分析软件、薄膜附件等等。测量模式:透过率、吸光度、浓度直读、反射方式、能量方式,单点、扫描均可;适应范围:科研、光学产品的检测、生化样品检测、复杂样品检测等。不但可以测液态样品,也可测固态样品。

        色谱分析过程中,缓冲液是不可或缺的,因为要用它来调节流动相的pH值,缓冲盐使用不当,后果可是吃不了兜着走。比如说,色谱柱压升高、柱效下降、保留时间异常等等不良影响、

        1)柱压升高;

        原因、缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出,堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙,阻碍流动相传质,引起柱压升高。

        2)相同化合物的保留时间发生变化;

        原因、如果没有冲洗干净就进行进样,色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化.

        3)色谱柱柱效下降;

        原因、

        1)有些缓冲盐会渗入到键合相的深处,损害硅胶基体,导致色谱柱键合相流失,柱床变松,柱效下降;

        2)凝结在键合相表面,使C18碳链难以舒展,对物质的保留能力下降,导致柱效下降。因此用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗,水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。

        使用前和使用后的处理:

        1、使用前的处理:

        在使用缓冲盐作流动相之前需要用不含缓冲盐的流动相冲洗色谱柱,直至基线平稳。原则上,用于冲洗的流动相与分析时所用的流动相含水的比例相同(或含水更多),不同的只是用于冲洗用的流动相中不含缓冲盐。理由、缓冲盐通常易溶于水,难溶于有机溶剂。用含缓冲盐的(特别是做流动相的水为饱和的缓冲盐溶液时)流动相进行分析时,如果分析前色谱柱中用于保存色谱柱的流动相中含水的比例相对较小,不先冲洗掉,接下来做样品的时候所用的流动相中如果有机溶剂含量大,而其比例中所含的水又不足以溶解该缓冲盐时,缓冲盐将会在色谱柱柱体上析出,沉积下来,这将可能导致上述对色谱柱的损害.

        2、使用后的处理:

        用与分析时含水比例相同的流动相(与分析用流动相******的区别是,用于冲洗的流动相不含缓冲盐)进行冲洗约30min,直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用,要长期保存,则需再加上一步,即用纯的有机溶剂冲洗一遍,直至基线平稳。

        用与分析时含水比例相同的流动相(与分析用流动相******的区别是,用于冲洗的流动相不含缓冲盐)进行冲洗约30min,直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用,要长期保存,则需再加上一步,即用纯的有机溶剂冲洗一遍,直至基线平稳.缓冲液可以提供离子平衡的反离子,并使流动相保持一定的离子强度和ph值,减少拖尾。

        3.使用注意事项:

        1、避免使用盐酸盐,盐酸盐对钢质有腐蚀作用。

        2、缓冲液******要现配现用,往往缓冲液是良好的菌类培养液,隔天或放置长时间实验时会有很多怪现象发生。

        3、实验后不可用有机溶剂直接过度,有机溶剂会处使盐类析出,造成液路或色谱柱堵塞,可用95、5的水甲醇冲洗。

        4、使用缓冲液要及时掌握ph范围,做到胸中有数。

        5、清洗液路和柱子时,有温控可加热到30摄氏度易于冲洗。

        6、长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出,若有白色盐类析出,可考虑一定周期用10%硝酸冲洗一下液路(拆下柱子,走30ml,再用5倍水冲洗)可以避免液路的堵塞。

        7、选择缓冲液要用可靠的试剂,避免不纯的盐类造成不必要的麻烦。

        如果流动相中有机溶剂的比例很高是不能用来冲洗缓冲盐的,是洗不出来的。通常赛分C18色谱柱先用5%~10%的甲醇冲洗,是可以把缓冲盐冲洗出来的,然后用纯的有机溶剂来保护柱子。******的方法是使用与流动相相同浓度不含盐的流动相进行清洗。但就是速度慢一些。用水是为了快速替换,一般在15分钟以内******,且用0.8的流速较好.如果用纯水冲,容易造成键合的碳链的流失,******用5%~10%甲醇水溶液冲.可以用纯水代替流动相中的缓冲液,有机相不变。这样冲洗柱子比较稳妥。

        8、实验室耗材色谱柱的选择

        1 如果需要购买色谱柱,或者是查看更多关于色谱柱技术方面的问题。

        液相色谱仪是属于易学难用的仪器,特别讲究“正确使用”和经验。液相工作者接触***多的是流动相,也就是流动相,是造成液相色谱各种问题的***主要源头。做好液相色谱仪的正确操作,能极大的降低故障率,减少维修和停机成本。下面就来说一说在液相色谱仪使用中的注意事项。

        一、泵是液相色谱仪的心脏。处于良好工作状态的泵,基线平稳,保留时间重现性好,梯度洗脱时压力变化缓慢而且平稳。泵的使用要注意:

        1.选择的溶剂和试剂,在进入仪器前用 0.45um MS过滤膜过滤,并进行脱气处理。

        2.泵开始使用时,一定要用合适的流动相彻底清洗干净。

        3.定期检查并更换在线过滤片及有关的垫圈,经常清洗进液处的微孔滤头。

        4.改变流动相时,应注意沉淀的产生,以防止泵堵塞。

        二、液相色谱法对液相色谱柱的要求是柱效高、选择性好,分析速度快等。PS(推荐使用赛分色谱柱)所以说色谱柱的正确使用和维护十分重要,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中,要注意下列问题,以维护色谱柱。

        1.避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况。因此在安装时要轻拿轻放。

        2.色谱柱PH使用范围是2.0-9.0。当使用PH值范围边界时,分析结束立即用与所使用流动相互溶的溶剂彻底清洗置换流动相。

        3.每次分析结束后,都要对色谱柱进行冲洗。每次工作完后,******用洗脱能力强的洗脱液冲洗,例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。当采用盐缓冲溶液作流动相时,使用完后应用无盐流动相冲洗。

        4.若长时间不用该色谱柱,要冲洗好后,用纯甲醇或乙腈封存。

        三、检测器是液相色谱的大脑,起着至关重要的作用。如何更好地发现和排除检测器故障是液相色谱使用的必备技能。

        1、检测器是液相色谱仪器的数据收集部分,由很多的电子和光学元件组成。禁止拆卸更动仪器内部元件防止损坏或影响准确度。

        2、仪器内部的流通池是流动相流过的元件,样品的干净程度和微生物的生长都可能污染流通池,导致无法检测或检测结果不准,所以在使用了一段时间以后要先用水冲洗流通池和管路再换有机溶剂冲洗。

        3、当仪器检测数据出现明显波动,基线噪音变大时要冲洗仪器管路,冲洗后如果还是没有改善就应该检测氘灯能量,如果能量不足就因更换新的氘灯。

        4、仪器在每次使用完了以后都要用水和一定浓度的有机溶剂冲洗管路,保证下次使用时管路和系统的清洁。

      固相萃取实质上是一种液相色谱分离,其主要分离模式也与液相色谱相同,可分为正相(吸附剂极性大于洗脱液极性),反相(吸附剂极性小于洗脱液极性),离子交换和吸附。固相萃取所用的吸附剂也与液相色谱常用的固定相相同,只是在粒度上有所区别。

        正相固相萃取的特点

        固相萃取是一种用途广泛而且越来越受欢迎的样品前处理技术。SPE是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附,与样品的基体和干扰化合物分离,然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附,达到分离和富集目标化合物的目的。因其具有安全、回收率高,重现性好、操作简便、快速、应用范围广、易实现自动化操作等特点。

        固相萃取方法的选择

        固相萃取技术的分离模式有多种,具体使用哪种方法,主要取决于待处理样品的相对分子质量(Mr)及样品的性质。

        1.选择固相萃取应考虑的问题:

        (1)待测物的化学性质:功能基团、能否离子化,是水溶性还是脂溶性。

        (2)基质的性质:pH值、离子强度、是水还是有机溶剂。

        (3)类似干扰物的性质。

        (4)待测物在样品中的浓度。

        (5)分析的检测限及灵敏度。

        (6)待测物是否需要富集、纯化。

        2.固定相的选择(根据相似相溶原则来选择固定相):

        SPE的固定相是样品分离、纯化的关键,由于固定相关系到SPE的重复性、回收率、灵敏度、特异性,因此SPE的吸附剂一直是人们关注的热点。自SPE发明以来,聚合树脂的样品污染一直令人苦恼,因此,提供了C18键合硅胶制成一次性小柱,具有很高的可靠性和稳定性,已广泛应用于临床生化检验。凡可用于HPLC的吸附剂均可用于SPE,包括近年来针对药物滥用检测的“designerphase”。吸附剂的选择既要考虑样品各组分与固定相的亲和力、待测物与洗脱剂的作用力,还要考虑其通用性。

        就目前化学键合相而言,非极性键合相有C1、C2、C4、C6、C8、环己烷基、苯基、二苯基、C18等;极性和弱离子交换相有:氰基、二醇基、氨基、伯胺/仲胺基、丁酸基;强离子交换相有:丙磺酸基、苯磺酸基、季铵基等;吸附树脂有:XAD-2、GDX、X-5。具有选择专属性的苯基磺酸可用于分离共平面连位羟基结构分子。对于生物样品,大多溶解在水性物质里,待测物被离子化,用离子交换萃取分离极性很强的物质,非极性或弱极性分析物用R-P提取,正相萃取用于提取有机溶剂中的极性物质。吸附剂的用量必须保证从样品中有效吸附所有的待测物,不保留基质成分,增加吸附剂的量可增大吸附能力,但同时也增大洗脱体积,使待测物稀释,给干燥和定量带来困难。因此在达到有效吸附的前提下用***小量的吸附剂。

        什么是细胞培养皿

        细胞培养皿是一种用于微生物或细胞培养的实验室器皿,由一个平面圆盘状的底和一个盖组成,一般用玻璃或塑料制成。它***初由在德国生物学家罗伯特·科赫手下工作的细菌学家朱利斯·理查德·佩特里(Julius Richard Petri,1852-1921)于1887年设计,故又称为“佩特里皿”。培养皿质地脆弱、易碎,故在清洗及拿放时应小心谨慎、轻拿轻放。使用完毕的培养皿******及时清洗干净,存放在安全、固定的位置,防止损坏、摔坏。

        细胞培养皿的清洗步骤

        一般经过浸泡、刷洗、浸酸和清洗四个步骤。

        1.浸泡:新的或用过的玻璃器皿要先用清水浸泡,软化和溶解附着物。新玻璃器皿使用前得先用自来水简单刷洗,然后用5%盐酸浸泡过夜;用过的玻璃器皿往往附有大量蛋白质和油脂,干涸后不易刷洗掉,故用后应立即浸入清水中备刷洗。

        2.刷洗:将浸泡后的玻璃器皿放到洗涤剂水中,用软毛刷反复刷洗。不要留死角,并防止破坏器皿表面的光洁度。将刷洗干净的玻璃器皿洗净、晾干,备浸酸。

        3.浸酸:浸酸是将上述器皿浸泡到清洁液中,又称酸液,通过酸液的强氧化作用清除器皿表面的可能残留物质。浸酸不应少于六小时,一般过夜或更长。放取器皿要小心。

        4.冲洗:刷洗和浸酸后的器皿都必须用水充分冲洗,浸酸后器皿是否冲洗的干净,直接影响到细胞培养的成败。手工洗涤浸酸后的器皿,每件器皿至少要反复“注水-倒空”15次以上,***后用重蒸水浸洗2-3次,晾干或烘干后包装备用。

        液相色谱仪峰分叉怎么回事?

        造成这种情况的原因一般是色谱柱被污染,或柱头填料塌陷导致的。

        对于******种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,***后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。

        对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。

        如何排除液相色谱仪气泡溢出故障?

        流动相内产生都无法清除不断产生的气泡,主要是因为过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。

        过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,打开purge键清洗脱气,如仍有气泡不断从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1.0~3.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。

        自检时有时会出现“钨灯能量低”的错误?

        一般来说,原因是系统中有挡光物,光路偏离,钨灯电源系统或钨灯灯泡已坏。这时首先要检查光度室是否有挡光物;打开检测器光源室盖,检查氘灯是否点亮;如果氘灯不亮,则关机,更换新氘灯,换时,需注意型号;检查氘灯保险丝,看是否松动、氧化、烧断;如果故障,应立即更换;再开机重新自检;若仍出现上述故障,则重新安装软件后再进行自检。

        出现压力波动大,流量不稳定?

        造成这种情况的原因是系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。

        液相色谱仪峰面积重复性不好?

        主要原因可能有进样阀漏液、加样针不到位或液量不足。针对******种情况,处理时应对更换进样阀垫圈;对于第二种情况保证加样针插到底,注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态,以保证进样量的准确。日常工作中,液相色谱仪的保养非常重要,如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中,储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液,每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净,防止无机盐析出或沉积;样品的前处理也很重要,任何样品都要尽可能地去除杂质,完全溶解,尽量减少对色谱柱的污染,以延长色谱柱的使用寿命,同时避免注射过浓的样品溶液,以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞;色谱柱作好标记,用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。

        液相色谱柱压升高?

        造成柱压升高的原因很多。一般是由于柱床内产生了异常的占位性物体,造成流体阻力加大所引起的。例如,缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内,或样品污染沉积。针对******种情况,处理时应先用40~50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,***后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上

        关于标示:

        1.液相色谱柱的流向不能改变

        在我们常规思维中,色谱柱上标示的流向是不可改变的,每次使用都要遵循。可是,大家有没有想过这个方向的作用是什么呢?为什么要标示一个使用方向呢?

        其实色谱柱前后端的填料及填装工艺都是一样的,标示方向的目的就是让我们在使用中记住流动相从哪个方向流入色谱柱,那么这个流入段就是***先污染端。这样就为我们日后维护或再生色谱柱做了准备,而我们需要遵循这个规定应该在色谱柱开始做样后。

        我曾将已经污染过的色谱柱反方向来使用,如果保留时间不是很长,而色谱柱足够长,还是能使用一段时间的。

        2.不去看说明书,直接就上机使用

        色谱柱内部保存着什么溶剂一定要看清楚,因此色谱柱的说明书一定要看清楚,当然也包括说明书上建议的维护保养规定,对我们都非常的有用。对于反相柱来说,溶剂基本就是乙腈或甲醇。但正相柱就不同了,因为正相柱除了可以适用正相系统,也可以适用反相系统,因此一定要看清楚,对于你的方法来说是否需要置换色谱柱内部保存溶剂。

        关于冲洗:

        3.用纯水冲洗色谱柱才能把缓冲液冲洗干净

        使用强溶剂冲洗色谱柱对内部填料的损伤是******的,尤其是纯水,除非你的色谱柱是耐水的。冲洗色谱柱******的方法是用流动相比例的水系和有机系来冲洗。如果你认为流动相比例无法把色谱柱冲洗干净或者此比例中有机系占有比例过大,你可以使用内含10%左右的纯水来冲洗。

        关于保存:

        4.保存在乙腈或甲醇中的新色谱柱可以直接使用

        理论上液相色谱柱不同于气相色谱柱需要活化,但是由于液相色谱柱内部保存的有机系具有挥发性,因此在使用前还是应该用小流速的和色谱柱内部相同的溶剂冲洗一定的时间。可以是0.5ml/min,120min,但******咨询厂家,根据色谱柱参数设定。

        5.色谱柱应该保存在纯乙腈或甲醇中

        根据第4条,色谱柱内部保存液具有挥发性,因此为了减少其挥发速度,可以添加5%-10%的水,这样的话可以在一定程度上减少一些有机系的挥发。如果再增加一个保险,我们可以在堵紧堵头后,再用封口膜封起来。同样道理,色谱柱一段时间不用后,也应该按照第4条,进行小流速的冲洗色谱柱。

        关于再生:

        6.色谱柱污染后把筛板卸下来超声清洗

        对于色谱柱的污染,首当其冲的就是筛板,因此我们***常用的做法就是把柱头卸下来,把筛板拿去超声清洗。但是我们在拆卸过程中对色谱柱前端填料的损害远远大于污染照成的伤害,因为我们不是专业的。因此建议这一步能不做就不做。

        7.自己填装色谱柱

        和第6条相同,这一步做法几乎可以把此色谱柱判死刑了,我们的填装工具有什么呢?就是手工的,其填装压力远远小于工厂内原始的填装压力。那么我们填装的结果会是个什么样也就很明显了。

        在我看来,自己填装也就是练练手,熟悉一下这个过程,要把色谱柱维修好的可能性几乎为零。

        8.用异丙醇冲洗再生后,柱子效果更差了

        这种情况我自己就遇到过,还好那根柱子本来就打算报废了,因此也没有照成多少损失。但是这是什么原因呢?其实很简单,就是在我反向冲洗前没有把管路中的污染物冲洗干净就直接接了柱子。所以说,方法是没有错的,色谱柱受污染时,我们应该先想到仪器也污染了!

        9.色谱柱的选择

        如果需要购买色谱柱,液相色谱柱,反相柱,正相柱,离子交换柱,等等,或者是需要查看更多关于液相色谱柱维护知识。

        MS-Clean?冻存管是由透明高分子材料聚丙烯制成的,经特殊工艺制造,使其能耐受超低温,并保证无泄露,管体可有清晰准确得刻度和手写的空白标签,方便记录,冻存管适用于细胞和组织的长期超低温冷藏。

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        货号

        描述

        包装(只/包)

        包装(只/箱)

        MS-Clean?冻存管

        LBFT18S

        冻存管1.8ml,自立式,灭菌

        500

        11000

        LBFT50S

        冻存管5.0ml,自立式,灭菌

        200

        4400

        气相色谱仪无论在工业生产过程还是日常生活中的使用都得到广泛应用,为达到使用者正确操作和保养,以下关于***新气相色谱简略的使用方法和说明。

        1、对色谱仪分析室的要求

        (1)分析室周围不得有强磁场,易燃及强腐蚀性气体。

        (2)室内环境温度应在5~35度范围内,湿度小于等于85%(相对湿度),且室内应保持空气流通。有条件的厂******安装空调。

        (3)基本具备好3000x800x600 (长X宽X高) (mm)的能承受整套仪器,便于操作的工作平台。平台不能紧靠墙,应离墙0.5~1.0米,便于接线及检修用。

        (4)为防止电压波动造成检测的干扰应装备单独容量在10KVA左右的动力线路电源。

        2、气源准备及净化

        (1)气源准备,事先准备好需用气体的高压钢瓶(一般大中城市均可购到),装某一种气体的钢瓶只能装这种气体,每个钢瓶的颜色代表一种气体,不能互换。一般用高纯氮气,高纯氢气,无油空气这三种气体,每种气体******准备两个钢瓶,以调换备用。有的厂使用氮气发生器、氢气发生器和空气压缩机也可,但空压机必须无油。凡钢瓶气压下降到1~2Mpa时,应更换气瓶。一般厂家使用使用以上气体99.99%即可,如气相色谱仪配备电子捕获检测器******使用钢瓶高纯气源,纯度在99.999%以上。

        (2)气源净化为了出去各种气体中可能含有的水分,灰分和有机气体成分,在气体进入仪器之前应先经过严格净化处理。现在国内的气体发生器具有较高的发展技术,一般配置分子筛或活性炭过滤净化装置,基本可以满足气相色谱仪要求。若使用钢瓶高纯气体,则需要进行净化过滤后使用。对一些的色谱仪附有净化器,且内已填有分子筛,活性炭,硅胶,基本可满足要求。

        3、气相色谱仪成套性检查及安放

        仪器开箱后,按资料袋内附件清单,进行逐项清点,并将易损零件的备件予以妥善保存。然后按照仪器的使用说明书上要求,将其放置于工作平台上,并对着接线图和各插头,插座将仪器各部分连接起来,***后连接色谱工作站。

        4、色谱仪气路连接和气路气密性检查

        对于气相色谱仪气路链接一般由色谱仪生产厂家工程技术人员进行,在无法达到满足的情况下应严格按照使用说明书中要求在专业人员指导下安装连接。

        气密性检查是一项十分重要的工作,若气路有漏,不仅直接导致仪器工作不稳定或灵敏度下降,而且还有发生泄漏的危险,特别是氢气更应该加以重视。气相色谱仪气密检查一般是检查载气流路,其重点是管路接头处,对于氢气和空气流路也要做相应的检查。

        液相色谱仪作为一种分离技术和方法,目前已经发展到一个全新的阶段。高精度的输液泵,应用广泛的色谱分离柱,低噪音、高灵敏度的各种检测器和功能强大的数据处理软件系统的出现,都推动了液相色谱技术的迅猛发展。液相色谱仪正以它分辨率高、分析速度快和应用广泛的优点倍受仪器分析工作者的青睐,广泛地应用于医药卫生、环境监测、食品检测等领域。

        应用HPLC技术在血药浓度、生物胺、核苷酸、蛋白质浓度测定等实际工作中,积累了许多的方法和经验,在这里与大家交流,希望能对同行们有所帮助和借鉴,共同促进液相色谱分析技术的发展。

        液相色谱仪使用过程中常见问题分析

        (一)液相色谱柱柱压问题

        液相色谱柱压过高,导致这种情况的直接原因可能是液相色谱柱或进样器流动不畅通。出现这种情况的根本原因可能是流动相抽滤不干净,存有杂质,从而堆积在色谱柱或过滤器中,这时只要重新配置一遍流动相。解决“堵”的方法就是检查色谱分离柱,确定其流动是否畅通,具体操作是在泵工作的情况下将色谱柱的出口处拧开,看看是否有流动相流出,同时可以调节流速,观察流动相流出的流量,进而判断色谱柱是否堵了。还有一些原因,比如:流动相的流速过大(一般为1.0ml/min)、流动相的成分不符合标准(没有使用HPLC级别的试剂或者没有超声完全)等。这些按照药典调整成正确的设置即可。如果怀疑是在线过滤器堵了可以关闭排液阀,断开出口管路,设定流速为1ml/min,如压力>3kgf/cm2,则可能堵塞,可以考虑将其置于5%稀硝酸,超声波清洗一段时间。***后******在检测验样品的时候加一个保护柱。有时候也会柱压过低,发生这个原因主要是连接不牢固,导致漏液,拧紧即可。更换流动相时没有进行脱气,导致仪器里面进入空气,一般的解决方法就是卸下超声清洗,然后进行脱气。

        (二)基线漂移

        在液相色谱仪启动之前,通常先启动半个小时后再进行操作,这样做是避免基线漂移。出现这种现象的原因很多,其一是色谱柱温差变化大,需要控制柱温,用色谱纯,也可多抽滤几次,除去醇溶性流动相外的其他流动相要勤更换,做到现配现用,以免滋生微生物,堵塞进样通道,造成基线不稳定,影响出峰。第三个原因是流路本身长期进样没有时间保养积淀的杂质。解决方法是用洗脱剂冲洗样品流动的通道,对于反相色谱系统的流动相******甲醇-水系统,按照梯度洗脱的方法冲洗掉系统和色谱柱中的杂质,以免影响样品的质量。必要时可以用异丙醇。第四个可能性就是由于紫外灯的使用寿命到了,不能再继续工作,解决方法是换紫外灯。***后是样品本身性质的影响,对于流动相的影响较大,解决方法就是用保护柱检测样品,以免出现问题。

        离子色谱仪可广泛应用于环境连续检测、生产过程连续检测等领域,该产品针对离子色谱法的在线检测问题,进行了离子色谱法的在线检测方法及检测工艺、色谱数据的在线自动处理、产品的检测能力及检测精度等方面的研究,技术属集成创新,其技术创新点主要体现在:

        1、设计了离子色谱法的在线检测流程,并采用嵌入式系统,实现了三通道并行全自动检测。

        2、采用电导法的在线检测工艺及数据自动处理技术,可同时自动检测阴离子F-、Cl-、NO2-、PO43-、Br-、NO3-、SO42-和阳离子Li、Na、NH4、K、Ca2、Mg2。3、创新性地提出了流动伏安检测方法,实现了重金属离子Cu2、Zn2、Pb2、Cd2的在线检测。

        离子色谱柱的维护:

        1、进入色谱柱的样品,均需要对其进行前处理。样品中固体悬浮物、有机物和重金属是影响色谱柱柱效的三大因素。

        固体悬浮物的消除:使用0.45或0.22微米孔径的微孔滤膜将样品过滤即可。

        有机物:固态样品,其各检测组份对高温仍比较稳定的,可以采用高温灰化-淋洗液或去离子水浸取法将有机,离子色谱仪直接IC检测。

        液态样品,可以采用22%双氧水微波消解1.5h除去有机物后调节PH至中性,直接IC进样检测。(注意溶液浓度之间的换算)

        重金属:可以将样品流经阳离子交换树脂除去重金属后直接IC进样。

        2、组份高含量样品影响离子色谱柱柱效。

        高Cl样品的处理:将样品通过Ag处理柱将Cl-除去后进样或稀释后进样分析。

        高SO42样品的处理:将样品通过Bs处理柱将SO42-除去后进样或稀释后进样分析。

        3、实验操作完毕,离子色谱柱用淋洗液密封保存。

        离子色谱是液相色谱的一种,故又称离子色谱(HPIC)或现代离子色谱,其有别于传统离子交换色谱柱色谱的主要是树脂具有很高的交联度和较低的交换容量,进样体积很小,用柱塞泵输送淋洗液通常对淋出液进行在线自动连续电导检测。离子色谱法是液相色谱法中分离分析溶液中离子组分的方法。离子色谱中使用的固定相是离子交换树脂。离子交换树脂上分布有固定的带电荷的基团和能游动的配位离子。

        在实验过程中经常遇到的情况:

        新的气相色谱柱,直接上分析条件来分析样品,发现分离情况不稳定。

        新的气相色谱柱,使用中发现压力突然升高。

        新的气相色谱柱,发现分离度、保留时间发生了变化。

        气相色谱柱使用不频繁,一开始分析样品效果比较好,但是,在使用过程中发现柱效下降快、峰形异常的情况。

        气相色谱峰形异常,基线不稳。

        当发生以上情况,请仔细检查,是否有某个操作疏忽了?

        1)测试柱性能

        通常情况下,我们建议用户在拿到气相色谱柱后,******件事情就是在一台性能完好的仪器系统上,按照厂家说明书对气相色谱柱进行柱效测试。其实,对于一个合格的色谱分析工作者来说,拿到一根新色谱柱,要开始一个课题之前,都会这样做,目的有二:一、了解气相色谱柱之前的情况并判断色谱柱是否正常。二、将检测结果小心保存,当实验过程中发现异常时,在检测柱效进行对比,来进一步排查原因。

        2)当反相使用高浓度缓冲盐时,注意过渡

        在使用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂时,一定要注意应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下,否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出,造成系统堵塞。另外,在发现系统压力升高异常时,要仔细检查,段段排除包括保护柱、混合器、管路或者流通池等。气相色谱柱的维护和保养

        3)当更换气相色谱柱时,原来的实验情况发生变化.

        首先,如果之前开发方法时色谱柱已经做过别的样品,那么之前的样品或使用的流动相对这个样品分析可能有干扰,只能重新找条件。建议:开发方法时使用新的气相色谱柱。(其次,如果是更换了品牌发生这样的情况,可能是由于不同品牌的键合技术不同,造成了选择性的细微差异 ,需要调整条件,并再次确定出峰顺序(有些样品的洗脱顺序会改变)。

        再次,如果是更换了同品牌型号的新的气相色谱柱发生这种情况,请检查之前分离时目标与杂质的分离度是否符合要求(Rs大于1.5),如果一开始只是勉强分开(Rs小于1.5),那只能说明方法没有优化好,需要再次进行优化。色谱柱的维护和保养

        4)样品及前处理

        样品要尽可能清洁,可选用样品过滤器或样品预处理柱(SPE)对样品进行预处理;若样品不便处理,要使用保护柱。流动相中所使用的各种有机溶剂要使用色谱纯,配流动相的水******是超纯水或双蒸水。如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好,尤其是含盐的流动相。另外,装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。

        5)气相色谱柱基线问题

        通常情况,基线问题是由于系统或者流动相引起的,和色谱柱关系不大。

        可能导致的原因:

        (1)泵头进气泡

        (2)系统污染

        (3)流通池漏液

        (4)流动相使用的某成分易挥发不稳定(检测波长不合适)

        (5)检测波长低,水的质量不好等等。

        6)KB气相色谱柱冲洗保养

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